Antifungal susceptibility profile of Aspergillus fumigatus isolates from avian lungs / Perfil de suscetibilidade antifúngica de isolados de Aspergillus fumigatus provenientes de pulmões de aves

Susceptibility testing is essential to inform the correct management of Aspergillus infections. In this study we present antifungal susceptibility profile of A. fumigatus isolates recovered from lungs of birds with and without aspergillosis. Fifty three isolates were tested for their antifungal susceptibility to voriconazole (VRC), itraconazole (ITZ), amphotericin (AMB) and caspofungin (CSP) using the M38-A2 broth microdilution reference method. Five isolates were resistant to more than one antifungal drug (CSP + AMB, VRC + ITZ and AMB + ITZ). Fifteen (28%) isolates with susceptible increased exposure (I) to ITZ were sensible to VRC. Resistance to AMB (>2µg/mL) was observed in only four isolates. Eleven (21%) A. fumigatus present resistance to ITZ (13%) and VRC (8%). Fungal isolation from respiratory samples has been regarded as being of limited usefulness in the ante mortem diagnosis of aspergillosis in birds. However, the results suggest that the detection and antifungal susceptibility profile may be helpful for monitoring of therapy for avian species and where antifungal resistance might be emerging and what conditions are associated to the event.(AU)

Os testes de suscetibilidade são essenciais para informar o correto manejo das infecções por Aspergillus. Neste estudo apresentamos o perfil antifúngico de isolados de A. fumigatus provenientes de pulmões de aves com e sem aspergilose. Cinqüenta e três isolados foram testados quanto à susceptibilidade antifúngica ao voriconazol (VRC), itraconazol (ITZ), anfotericina B (AMB) e caspofungina (CSP) pelo método de referência de microdiluição do caldo M38-A2. Cinco isolados foram resistentes a mais de um antifúngico (CSP + AMB, VRC + ITZ e AMB + ITZ). Quinze (28%) isolados suscetíveis - com exposição aumentada (I) ao ITZ foram sensíveis ao VRC. A resistência ao AMB (>2µg/mL) foi observada em apenas quatro isolados. Onze (21%) A. fumigatus apresentaram resistência a ITZ (13%) e VRC (8%). O isolamento de fungos de amostras respiratórias tem sido considerado de utilidade limitada no diagnóstico ante mortem de aspergilose em aves. No entanto, os resultados sugerem que a detecção e o perfil de suscetibilidade a antifúngicos podem ser úteis para o monitoramento da terapia de espécies aviárias, assim como a emergência da resistência antifúngica e quais condições podem estar associadas ao evento.(AU)

Isolamento e caracterização de espécies de Pythium de ambientes aquáticos no Estado do Rio Grande do Sul e avaliação da patogenicidade em modelo experimental / Isolation and characterization of Pythium species from swampy areas in the Rio Grande do Sul, Brazil, and evaluation of pathogenicity in an experimental model

Foram coletadas 186 amostras de água de ambientes pantanosos em 13 municípios das regiões Sul, Central e Oeste do Rio Grande do Sul, Brasil, com o objetivo de isolar e caracterizar espécies de Pythium e avaliar a sua patogenicidade empregando coelhos como modelo experimental. Em 11,8% (n=22) das águas coletadas foram isoladas diferentes espécies de Pythium incluindo: P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoósporos desses micro-organismos foram produzidos in vitro e inoculados por via subcutânea em coelhos, os quais foram avaliados durante 45 dias. Dentre os oomicetos testados, apenas P. insidiosum evidenciou patogenicidade, causando pitiose no modelo experimental, evidenciando que, em nossas condições, apenas esta espécie de Pythium é patógena para mamíferos.(AU)

One hundred and eighty-six water samples from swampy areas were collected in 13 municipalities of South, Central and West regions of Rio Grande do Sul, Brazil, in order to isolate and characterize Pythium species and assess their pathogenicity using rabbits as experimental model. Different Pythium species were isolated from 22 (11.8%) water samples, including P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoospores of these microorganisms were produced in vitro and inoculated subcutaneously into rabbits, which were assessed over 45 days. Only P. insidiosum showed pathogenicity, causing pythiosis in the experimental model.(AU)

Pythiosis in sheep from Paraná, southern Brazil / Pitiose em ovinos no Paraná, Sul do Brasil

This paper reports pythiosis in a sheep from southwestern Paraná, Brazil, confirmed by indirect ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent Assay) and immunohistochemistry, as well as it describes the macro and microscopic injuries, in order to understand the pathogenicity. A 4-year-old ewe from a flock of 30 Santa Inês sheep, raised semi-extensively with access to a weir, showed cachexia, bilateral enlargement in nasal region, a serous and bloody secretion with a fetid odor from its nose and swollen submandibular and retropharyngeal lymph nodes. Blood collection was performed trough jugular vein puncture in order to make complete blood cell count (CBC) and to obtain serum for the subsequent serological examination...

Este trabalho tem como objetivo descrever um caso de pitiose confirmado por ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent Assay) indireto e imuno-histoquímica em uma ovelha do sudoeste do Paraná, Brasil, bem como suas lesões macro e microscópicas, a fim de compreender a sua patogenicidade. Trata-se de um ovino, fêmea, de 4 anos de idade, de um rebanho de 30 animais, da raça Santa Inês, criados em sistema semiextensivo, com acesso à um açude. O animal vinha apresentando aumento de volume na região do focinho, associado a emagrecimento progressivo. No exame físico apresentou-se caquético, com aumento de volume bilateral na região nasal, e com uma secreção serosanguinolenta de odor fétido fluindo das narinas, além de possuir os linfonodos submandibulares e retrofaríngeos bilateralmente infartados. Foi realizada coleta de sangue por punção da veia jugular para realização do hemograma e obtenção do soro para posterior realização de exame sorológico....

SUSCEPTIBILITY OF Candida spp. ISOLATED FROM BLOOD CULTURES AS EVALUATED USING THE M27-A3 AND NEW M27-S4 APPROVED BREAKPOINTS / Suscetibilidade de Candida spp. isoladas de hemocultivos, avaliadas pelos breakpoints dos documentos M27-A3 e M27-S4 do CLSI

The high mortality rates associated with candidemia episodes and the emergence of resistance to antifungal agents necessitate the monitoring of the susceptibility of fungal isolates to antifungal treatments. The new, recently approved, species-specific clinical breakpoints (SS-CBPs)(M27-S4) for evaluating susceptibility require careful interpretation and comparison with the former proposals made using the M27-A3 breakpoints, both from CLSI. This study evaluated the susceptibility of the different species of Candida that were isolated from candidemias based on these two clinical breakpoints. Four hundred and twenty-two isolates were identified and, among them, C. parapsilosis comprised 46.68%, followed by C. albicans (35.78%), C. tropicalis (9.71%), C. glabrata (3.55%), C. lusitaniae (1.65%), C. guilliermondii (1.65%) and C. krusei (0.94%). In accordance with the M27-A3 criteria, 33 (7.81%) non-susceptible isolates were identified, of which 16 (3.79%) were resistant to antifungal agents. According to SS-CBPs, 80 (18.95%) isolates were non-susceptible, and 10 (2.36%) of these were drug resistant. When the total number of non-susceptible isolates was considered, the new SS-CBPs detected 2.4 times the number of isolates that were detected using the M27-A3 interpretative criteria. In conclusion, the detection of an elevated number of non-susceptible species has highlighted the relevance of evaluating susceptibility tests using new, species-specific clinical breakpoints (SS-CBPs), which could impact the profile of non-susceptible Candida spp. to antifungal agents that require continuous susceptibility monitoring.

As elevadas taxas de mortalidade associadas com episódios de candidemia e a emergência da resistência aos antifúngicos, requerem o monitoramento da suscetibilidade de Candida spp., isoladas das candidemias, frente aos agentes antifúngicos. Os novos breakpoints, chamados “espécie-específicos,” foram recentemente aprovados (M27-S4) requerendo, pois, cuidadosa interpretação e comparações com aqueles até agora utilizados (M27-A3); ambos são propostos pelo Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI). O presente estudo avaliou a suscetibilidade de espécies de Candida isoladas de candidemias baseando-se nestes dois breakpoints. Quatrocentos e vinte e dois isolados de Candida foram identificados e assim distribuídos: C. parapsilosis (48,68%), C. albicans (35,78%), C. tropicalis (9,71%), C. glabrata (3,55%), C. lusitaniae (1,65%), C. guilliermondii (1,65%), C. krusei (0,94%). Com base nos critérios do M27-A3, um total de 33 (7,81%) isolados foram julgados não-sensíveis, dos quais 16 (3,79%) como resistentes aos antifúngicos. De acordo com os breakpoints espécie-específicos (M27-S4) um total de 80 (18,95%) isolados foram considerados não-sensíveis, dos quais 10 (2,36%) resistentes a algum dos antifúngicos testados. Com base nos novos breakpoints espécie-específicos, o número de isolados não-sensíveis foi 2,4 vezes maior do que o número de não-sensíveis detectado pelos breakpoints do documento M27-A3. A detecção de um elevado número de isolados não-sensíveis através dos breakpoints propostos pelo M27-S4 destaca a importância dos testes de suscetibilidade, os quais trarão impactos no reconhecimento de isolados de Candida spp. não-sensíveis em episódios de candidemias, requerendo, portanto, continua avaliação.

Efeitos in vitro de ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre a viabilidade celular e atividade de E-ADA em linfócitos de frangos de corte / In vitro effects of ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on cell viability and E-ADA activity in broiler chickens lymphocytes

Mycotoxins are a group of chemically diverse naturally occurring substances resulting from the secondary metabolism of pathogenic filamentous fungi. They are produced mainly by the genera Fusarium, Alternaria, Aspergillus and Penicillium which can contaminate grains and cereals such as wheat, corn and soy. According to the nature and the concentration levels, mycotoxins can induce toxic effects in food-production animals and humans. An in vitro study was conducted to evaluate the susceptibility of broiler chickens lymphocytes to different concentrations of ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone. Each toxin was added to the cell medium at different concentrations (0.001, 0.01, 0.1 and 1μg/mL). Cell viability and ecto-adenosine deaminase activity were assessed at 24, 48 and 72 hours by colorimetric assays. Thus, it were used 0.7x10(5) lymphocytes/mL in RPMI 1640 medium, supplemented with 10% fetal bovine serum and 2.5 IU of penicillin/streptomycin per mL, incubated at 37°C in a 5% CO2 atmosphere. All the experiments were carried out in triplicate and the results were expressed as mean ± standard error of the mean. The results showed that OTA and DON induced lymphocyte proliferation and reduced enzymatic activity in vitro (P<0,05), whereas ZEA also promoted proliferation (P<0,05), but neither alteration on enzymatic activity (P>0,05). It was possible to correlate the results about viability cell and ecto-adenosine deaminase activity, suggesting that, at minimal concentrations, the evaluated mycotoxins do not stimulated the enzymatic activity, which has proinflammatory action and contributes for the immunosuppression process, thus, avoiding a decrease on the viability cell. This is the first in vitro study conducted with OTA, DON and ZON in broiler chickens lymphocytes evaluating these parameters.

Micotoxinas representam um vasto grupo de contaminantes químicos naturais originados a partir do metabolismo secundário de fungos filamentosos patogênicos. Elas são produzidas, principalmente, pelos gêneros Fusarium, Alternaria, Aspergillus e Penicillium, os quais podem contaminar grãos e cereais, como trigo, milho e soja. Conforme sua natureza e níveis de concentração, micotoxinas podem induzir efeitos tóxicos em animais de produção e humanos. Um estudo in vitro foi realizado para avaliar a susceptibilidade das células linfocitárias de frangos de corte a diferentes concentrações de ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona. Cada micotoxina foi adicionada ao meio celular em diferentes concentrações (0,001; 0,01; 0,1 e 1μg/mL). A viabilidade celular e atividade de ecto-adenosina desaminase foram analisadas em 24, 48 e 72 horas através de ensaios colorimétricos. Para isso, foram utilizados 0,7x10(5) linfócitos/mL em meio RPMI 1640, suplementado com 10% de soro fetal bovino e 2,5 UI de penicilina/estreptomicina por mL, incubados em atmosfera de 5% de CO2 a 37 °C. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e os resultados foram expressos como média e erro padrão da média. Os resultados obtidos demonstraram que tanto ocratoxina A como deoxinivalenol induziram proliferação linfocitária e baixa atividade enzimática in vitro (P<0,05), enquanto zearalenona também induziu proliferação (P<0,05), mas nenhuma alteração na atividade enzimática (P>0,05). Foi possível correlacionar os dados referentes à viabilidade celular e atividade de ecto-adenosina desaminase, sugerindo que, em concentrações mínimas, as micotoxinas testadas não estimularam a atividade da enzima, que possui ação pró-inflamatória e contribui para o processo de imunossupressão e, portanto, evitando um decréscimo na viabilidade celular. Este é o primeiro estudo feito com OCRA, DON e ZEA sobre linfócitos de frangos de corte em cultivos in vitro na avaliação desses parâmetros.

Pitiose em ovinos nos estados de Pernambuco e Bahia / Pythiosis in sheep from Pernambuco and Bahia States, Brazil

A pitiose é uma doença infecciosa causada pelo oomiceto aquático P. insidiosum que acomete animais e o homem, especialmente habitantes de áreas úmidas. A enfermidade apresenta como característica principal a formação de lesões com aspecto granulomatoso nos hospedeiros. Neste trabalho, relatou-se a ocorrência da pitiose em ovinos nos estados de Pernambuco (PE) e Bahia (BA), Nordeste do Brasil, bem como foi avaliada a eficácia de um imunoterápico frente a esta enfermidade. Amostras de sangue de 53 ovinos foram coletadas, sendo 49 animais oriundos de propriedades localizadas em PE e quatro animais provenientes da BA. Sete ovinos demonstraram sinais clínicos de pitiose ovina. Um dos animais foi submetido à eutanásia e sua cabeça e linfonodo submandibular foram coletados e enviados para análises laboratoriais. Seis ovinos foram submetidos à imunoterapia, sendo mantidos nas instalações do setor de ovinocultura da Univasf/Petrolina-PE durante o tratamento. As técnicas de ELISA, cultura fúngica e reação em cadeia da polimerase (PCR) foram utilizadas como métodos diagnósticos da pitiose ovina, sendo eficientes para confirmação dos casos clínicos no rebanho. Ao exame microscópico do material coletado da cavidade nasal de um animal eutanasiado, observou-se uma área focalmente extensa de necrose com presença de infiltrado difuso de neutrófilos íntegros e degenerados margeando a cartilagem. Somente um animal apresentou cura clínica, indicando uma eficiência no tratamento da pitiose de 16,7% (1/6). O aumento de casos de pitiose tem sido denotado em diversos municípios de PE e da BA. Neste contexto, o emprego do imunoterápico pode ser uma alternativa a ser pesquisada. Portanto, estudos futuros devem ser realizados para investigar o efeito da imunoterapia aplicada à pitiose em ovinos.

Pythiosis is a devastating infectious disease caused by an aquatic oomycete, Pythium insidioum, and affects animals and humans that inhabit wetlands. The disease is characterized mainly by granulomatous lesions in the hosts. The purpose of this study was to report the occurrence of pythiosis in sheep in the states of Pernambuco (PE) and Bahia (BA), Northeastern Brazil, as well as to evaluate the efficacy of an immunotherapic against ovine pythiosis. Blood samples were collected from 53 sheep, 49 from flocks in counties located in PE and four from BA. Seven sheep showed clinical signs of ovine pythiosis; one of them was submitted to euthanasia and its head and submandibular lymph node was collected and sent for histopathologic and mycological analyses. Other six sheep were treated with an immunotherapic. During the treatment the animals were kept in the Sheep Industry Sector facilities at Univasf/Petrolina-PE. ELISA, fungal culture and polymerase chain reaction (PCR) methods were used to confirm the diagnosis of clinical ovine pythiosis in the sheep flock. At microscopic examination of the material collected from the nasal cavity of a sheep euthanized was observed a focally extensive area of necrosis with presence of diffuse infiltration of intact and degenerated neutrophils bordering the cartilage. Only one sheep showed clinical cure, indicating efficiency in the pythiosis treatment of 16.7% (1/6). Ovine pythiosis has been increasing in several municipalities of PE and BA. In this context, the immunotherapy may be an alternative to be searched. Therefore, further studies are needed to investigate the effect of immunotherapy on ovine pythiosis.

Pythium insidiosum: morphological and molecular identification of Brazilian isolates / Pythium insidiosum: identificação morfológica e molecular de isolados brasileiros

Pythium insidiosum is an oomycete belonging to the kingdom Stramenipila and it is the etiologic agent of pythiosis. Pythiosis is a life-threatening infectious disease characterized by the development of chronic lesions on cutaneous and subcutaneous, intestinal, and bone tissues in humans and many species of animals. The identification of P. insidiosum is important in order to implement a rapid and definitive diagnosis and an effective treatment. This study reports the identification of 54 isolates of P. insidiosum of horses, dogs and sheep that presented suspicious clinical lesions of pythiosis from different regions in Brazil, by using morphological and molecular assays. Throughout the PCR it was possible to confirm the identity of all Brazilian isolates as being P. insidiosum.

Pythium insidiosum é um oomiceto pertencente ao Reino Stramenopila e agente etiológico da pitiose, uma doença infecciosa com riscos de morte. A pitiose é caracterizada pelo desenvolvimento de lesões crônicas sobre os tecidos cutâneos, subcutâneas, intestinal e ósseo em humanos e muitas espécies de animais. A identificação de P. insidiosum é importante, a fim de se obter um diagnóstico rápido e definitivo, bem como um tratamento eficaz. Este estudo relata a identificação de 54 isolados de P. insidiosum de cavalos, cães e ovelhas que apresentavam lesões compatíveis e suspeita clínicas de pitiose, provenientes de diferentes regiões do Brasil, através de métodos morfológicos e moleculares. Através da PCR foi possível confirmar a identidade de todos os isolados brasileiros como sendo P. insidiosum.

Sistema de pastejo, rotenona e controle de parasitas em bovinos cruzados: efeito no ganho de peso e no parasitismo / Grazing systems, rotenone and parasites control in crossbred calves: effect on live weight gain and on parasites burdens

Foram realizados dois experimentos para avaliar o controle de endo e ectoparasitos de bovinos. No primeiro avaliou-se in vitro e, em animais experimentalmente infestados, o efeito da rotenona no carrapato Rhipicephalus(Boophilus) microplus e, no segundo, avaliou-se o efeito do pastejo rotacionado e de tratamentos contra endo e ectoparasitos na carga parasitária e no desenvolvimento de animais naturalmente parasitados. In vitro a rotenona mostrou ação acaricida nas larvas e nas teleóginas, e nas larvas nos animais estabulados. Três tratamentos com endectocida, no período seco, diminuiram significativamente a contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e o número de teleóginas, e, aumentou significativamente o ganho médio de peso. Os animais tratados com uma aplicação de levamisol estavam nesse período com médias de OPG intermediárias e significativamente diferentes dos grupos controle e tratados com endectocida. O ganho de peso, entretanto, não diferiu significativamente do grupo controle. No período das águas, os animais tratados com fipronil estavam significativamente menos parasitados por teleóginas, mosca-dos-chifres e por larvas de Dermatobia hominis; e os tratados com rotenona. menos parasitados por mosca-dos-chifres que os animais controle. Diferentemente do esperado, os animais sob pastejo rotacionado estavam no período seco com OPG significativamente maior que os em sistema contínuo. Três tratamentos com endectocida, no período seco, e três tratamentos acaricida com fipronil, na estação chuvosa, diminuíram significativamente o OPG, o número de teleóginas e o de larvas de berne, e proporcionou um aumento significativo de 23 kg de peso vivo em relação aos animais não tratados.

Practices for endo and ectoparasite control in beef cattle were evaluated in two independent experiments. First, the effects of rotenone® on Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks were evaluated in vitro and in experimentally infected calves. In the second trial, the effects of grazing systems associated with endo and ectoparasite treatments on parasite burden and weight gain of naturally parasited animals were evaluated. Rotenone showed acaricide action on larvae and engorged ticks during in vitro tests and on larvae in experimentally infected calves. Three treatments with endectocide decreased (P < .05) the number of EPG and ticks and increased (P < .05) the weight gain in the dry season. Animals treated with only one application of levamisole showed EPG intermediate and different (P < .05) from the groups treated with endectocide (lower) and control (higher) in the dry season, but the weight gain obtained with this treatment did not differ from the control group. During the raining season the animals treated with fipronil were significantly less parasited by horn fly, tick and larvae of Dermatobia hominis and the group treated with rotenone were significantly less parasited by horn fly in relation to control. Animals under rotational grazing showed significantly higher EPG than those under continuous grazing. Three treatments with endectocide in the dry season plus three acaricide treatments with fipronil in the raining season reduced EPG, tick, and screw worm larva counts, and provided a significant increase (23 kg) of live weight gain in relation to untreated animals.

Detection of Pneumocystis in lungs of bats from Brazil by PCR amplification / Detecção de Pneumocystis em pulmões de morcegos no Brasil por Nested-PCR

Pneumocystis has been isolated from a wide range of unrelated mammalian hosts, including humans, domestic and wild animals. It has been demonstrated that the genome of Pneumocystis of one host differs markedly from that of other hosts. Also, variation in the chromosome and DNA sequence of Pneumocystis within a single host species has been observed. Since information about the occurrence and nature of infections in wild animals is still limited, the objective of this work was to detect the presence of Pneumocystis sp. in lungs of bats from two states from Brazil by Nested-PCR amplification. The bats, captured in caves and in urban areas, were obtained from the Program of Rabies Control of two States in Brazil, Mato Grosso and Rio Grande do Sul, located in the Mid-Western and Southern regions of the country, respectively. DNAs were extracted from 102 lung tissues and screened for Pneumocystis by nested PCR at the mtLSU rRNA gene and small subunit of mitochondrial ribosomal RNA (mtSSU rRNA). Gene amplification was performed using the mtLSU rRNA, the primer set pAZ102H - pAZ102E and pAZ102X - pAZY, and the mtSSU rRNA primer set pAZ102 10FRI - pAZ102 10R-RI and pAZ102 13RI - pAZ102 14RI. The most frequent bats were Tadarida brasiliensis (25), Desmodus rotundus (20), and Nyctinomops laticaudatus (19). Pneumocystis was more prevalent in the species Nyctinomops laticaudatus (26.3 percent = 5/19), Tadarida brasiliensis (24 percent = 6/25), and Desmodus rotundus (20 percent = 4/20). Besides these species, Pneumocystis also was detected in lungs from Molossus molossus (1/11, 9.1 percent), Artibeus fimbriatus (1/1, 100 percent), Sturnira lilium (1/3, 33.3 percent), Myotis levis (2/3, 66.7 percent)and Diphylla ecaudata (1/2, 50 percent). PCR products which could indicate the presence of Pneumocystis (21.56 percent) were identified in DNA samples obtained from 8 out of 16 classified species from both states (5 bats were not identified). This is the ...

Pneumocystis tem sido isolado de uma grande variedade de hospedeiros mamíferos, incluindo humanos, animais domésticos e selvagens. Tem se demonstrado que o genoma do Pneumocystis de um hospedeiro difere marcadamente do de outros, assim como há variação no cromossomo e na seqüência de DNA dentro de uma única espécie de hospedeiro. Sabendo que a informação da ocorrência e natureza da infecção em animais silvestres ainda é limitada, o objetivo do trabalho foi detectar, por Nested-PCR, a presença de Pneumocystis sp. em pulmões de diferentes espécies de morcegos de dois estados do Brasil. Estes mamíferos voadores foram capturados em cavernas, áreas florestadas, de campo e urbanas pelo Programa de Controle da Raiva do Mato Grosso (região Centro-Oeste) e do Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (RS) e Instituto Sauver no Rio Grande do Sul (região Sul). Os DNAs foram extraídos de 102 pulmões e realizado Nested-PCR utilizando os primers pAZ102H-pAZ102E e pAZ102X/R1-pAZY/R1 para amplificação do gene mtLSU-rRNA, e pAZ102 10F-RI - pAZ102 10R-RI e pAZ102 13-RI - pAZ14-RI para amplificação do gene mtSSU-rRNA. As espécies mais freqüentes foram Tadarida brasiliensis (25), Desmodus rotundus (20) e Nyctinomops laticaudatus (19). Pneumocystis foi detectado com maior prevalência nas Nyctinomops laticaudatus (26,3 por cento = 5/19), Tadarida brasiliensis (24 por cento = 6/25) e Desmodus rotundus (20 por cento = 4/20). Além destas espécies, Pneumocystis foi também detectado nos pulmões de Molossus molossus (1/11, 9,1 por cento), Artibeus fimbriatus (1/1, 100 por cento), Sturnira lilium (1/3, 33 por cento), Myotis levis (2/3, 66,7 por cento)e Diphylla ecaudata (1/2, 50 por cento). Os produtos de PCR indicaram a presença de Pneumocystis (21.56 por cento) em amostras obtidas de 8 das 16 espécies classificadas para ambos os estados (cinco morcegos não foram classificados). Este é o primeiro registro de detecção de Pneumocystis em morcegos no Brasil.

Surto de pitiose cutânea em bovinos / Outbreak of cutaneous pythiosis in cattle

Setenta e seis bovinos, sem raça definida, jovens, de ambos os sexos, apresentaram lesões cutâneas multifocais nodulares, ulceradas e crostosas nas faces medial e lateral dos membros anteriores e posteriores, região ventral do pescoço, esterno e cauda. A doença ocorreu no verão e as lesões foram observadas nas regiões do corpo que ficavam grande tempo em contato com a água em canais de irrigação. Histologicamente observaram-se múltiplos granulomas e piogranulomas contendo escassas imagens negativas de hifas na área central, as quais foram melhor evidenciadas através da técnica de metenamina nitrato de prata de Grocott. O diagnóstico etiológico definitivo foi baseado na técnica de imuno-histoquímica com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum. Adicionalmente, foi realizado o teste de ELISA indireto. Surtos de pitiose cutânea bovina são incomuns e, particularmente neste relato, todos os animais afetados tiveram cura espontânea das lesões dentro de duas a três semanas.(AU)

Seventy-six young mixed breed cattle of both sexes, presented multifocal ulcerated nodular cutaneous lesions localized in the medial and lateral aspects of fore and hindlimbs, ventral neck, sternum, and tail. The disease occurred during summer and lesions were observed on areas of the body which were in contact with water of irrigation channels for long periods. Histologically, there were multiple granulomas and pyogranulomas with few negative profiles of hyphae, which were better visualized throughout Grocott methenamine silver stain. Definitive etiologic diagnosis was based on immuno-histochemistry with anti-Pythium insidiosum polyclonal antibody. Additionally, an indirect ELISA test was performed. Bovine cutaneous pythiosis outbreaks are uncommon and, particularly as occurred in the cattle of this report, all affected animals had spontaneous healing within two to three weeks.(AU)

Enzymatic and hemolytic activities of Candida dubliniensis strains

Candida dubliniensis is an opportunistic yeast that has been recovered from several body sites in many populations; it is most often recovered from the oral cavities of human immunodeficiency virus-infected patients. Although extensive studies on epidemiology and phylogeny of C. dubliniensis have been performed, little is known about virulence factors such as exoenzymatic and hemolytic activities. In this study we compared proteinase, hyaluronidase, chondroitin sulphatase and hemolytic activities in 18 C. dubliniensis and 30 C. albicans strains isolated from AIDS patients. C. albicans isolates produced higher amounts of proteinase than C. dubliniensis (p < 0.05). All the tested C. dubliniensis strains expressed hyaluronidase and chondroitin sulphatase activities, but none of them were significantly different from those observed with C. albicans (p > 0.05). Hemolytic activity was affected by CaCl2; when this component was absent, we did not notice any significant difference between C. albicans and C. dubliniensis hemolytic activities. On the contrary, when we added 2.5 g percent CaCl2, the hemolytic activity was reduced on C. dubliniensis and stimulated on C. albicans tested strains (p < 0.05).

C. dubliniensis é uma levedura oportunista que, embora já tenha sido isolada de vários sítios anatômicos é, com maior frequência, encontrada na boca de pacientes infectados pelo HIV. Embora tenham sido realizados numerosos estudos sobre a epidemiologia e filogenia, seus fatores de virulência como atividade exoenzimática e atividade hemolítica, são, ainda, pouco conhecidos. Neste estudo comparou-se a atividade in vitro de proteinase, hialuronidase, condroitin sulfatase e atividade hemolítica de 18 cultivos de C. dubliniensis com 30 cultivos de C. albicans, todos isolados de pacientes com SIDA. Foi evidenciada maior atividade de proteinase em C. albicans em relação a C. dubliniensis (p < 0,05). Todos os isolados de C. dubliniensis evidenciaram atividade de hialuronidase e condroitin-sulfatase de forma similar ao observado com C. albicans (p > 0,05). Constatou-se que a atividade hemolítica foi influenciada pelo CaCl2; em sua ausência não foram observadas diferenças na atividade hemolítica das duas espécies; todavia, ao se agregar 2,5 por cento de CaCl2, a atividade hemolítica de C. dubliniensis foi reduzida enquanto a de C. albicans, estimulada (p < 0,05).

Teste de ELISA indireto para o diagnóstico sorológico de pitiose / Indirect ELISA for the serodiagnostic of pythiosis

A pitiose, doença granulomatosa de eqüinos causada pelo oomiceto Pythium insidiosum, tem como característica a evolução rápida seguida de morte dos animais. Estas mortes muitas vezes são causadas por diagnósticos errôneos ou demorados quando os doentes já não respondem ao tratamento. Este trabalho teve por objetivo a padronização do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para diagnóstico sorológico de pitiose em eqüinos e coelhos, visando a diminuição de erros e de tempo necessário para o diagnóstico. Para o desenvolvimento e validação do teste foram utilizadas 72 amostras de soro de eqüinos saudáveis e 44 soros de eqüinos com pitiose confirmada. Os resultados da validação do ELISA para eqüinos foram: sensibilidade 97,72 por cento, especificidade 90,27 por cento, valor preditivo positivo 86 por cento, valor preditivo negativo 98,4 por cento e eficiência de 93,1 por cento. Para coelhos, o teste foi padronizado com 48 amostras de soro de animais saudáveis e 24 amostras de coelhos imunizados com antígenos de P. insidiosum. Os resultados foram: sensibilidade 91,66 por cento, especificidade 95,83 por cento, valor preditivo positivo 91,66 por cento, valor preditivo negativo 95,83 por cento e eficiência de 94,44 por cento. Os resultados deste trabalho demonstram que o ensaio imunoenzimático indireto é um método seguro e eficaz para o diagnóstico sorológico da pitiose.

Utilizacão do ágar suco de tomate (ágar V8) na identificacão presuntiva de Candida dubliniensis / Utilization of tomato juice agar (V8 agar) in the presumptive identification of Candida dubliniensis

Avaliou-se a capacidade do ágar suco de tomate (ágar V8) em diferenciar Candida dubliniensis de Candida albicans com base na producão de clamidoconídios. Noventa e três isolados de Candida albicans e vinte e seis de Candida dubliniensis foram incluídos; 100 por cento de Candida dubliniensis formaram clamidoconídios e 92,5 por cento de Candida albicans não evidenciaram estas estruturas. Estes resultados permitem sugerir este meio como recurso alternativo na identificacão presuntiva de Candida dubliniensis.

Carbohydrate assimilation profiles of Brazilian Candida dubliniensis isolates based on ID 32C system

Dezenove culturas de C. dubliniensis isoladas no Brasil, previamente identificadas através de métodos genotípicos, foram avaliadas pelo kit comercial ID 32C (bioMerieux). Treze culturas foram identificadas como C. dubliniensis, mas as demais (seis) evidenciaram perfil duvidoso, embora o software do sistema sugerisse 83,6% de chances das mesmas pertencerem à espécie C. dubliniensis. A literatura tem registrado grande variabilidade fenotípica com esta espécie e, por isto, as identificações obtidas com este sistema deverão ser consideradas como presuntivas.

Susceptibility to heat and antifungal agents of Cryptococcus neoformans var. neoformans (serotype D) isolated from Eucalyptus spp in Rio Grande do Sul, Brazil

Este estudo foi realizado com os primeiros isolados ambientais de C. neoformans sorotipo D, obtidos no Rio Grande do Sul. Objetivando-se avaliar a susceptibilidade a agentes antifúngicos de forma mais rigorosa, utilizou-se a técnica de referência proposta pelo NCCLS, Caldo Yeast Nitrogen Base (YNB) proposto por Ghannoum et al., Antibiotic medium 3, caldo YNB adequado à metodologia do NCCLS e o E-test. Os resultados indicaram que todos os isolados foram sensíveis à anfotericina B (0,0625-0,5 µg/mL), fluconazol (0,125-4,0 µg/mL), itraconazol (0,031-0,25 µg/ml) e fluorocitosina (0,125-4,0 µg/mL) através das técnicas empregadas. Nos testes de termotolerância (47ºC/30 min), observou-se que as culturas de C. neoformans sorotipo D são mais sensíveis do que as de C. neoformans sorotipo A.

Dermatose causada por Cheyletus sp: relato de um caso / Dermatosis caused by Cheyletus sp: a case report

Relata-se um caso de dermatose devido a infestação causada por ácaros do gênero Cheyletus. Aspectos do diagnóstico eocorrência desta rara infestação são também discutidos...

Different culture media applied to the study of Cryptococcus neoformans susceptibility to amphotericin B and fluconazole

This study compared the performance of three culture media used for the determination of minimal inhibitory concentration (MIC) of amphotericin B and fluconazole against 48 Cryptococcus neoformans strains. For amphotericin B the media employed were RPMI 1640 medium, as indicated by NCCLS as reference, Yeast Nitrogen Base (YNB) as proposed by Ghannoum et al. (YNB-1), Antibiotic medium 3 (AM3) indicated by others, and YNB as proposed by us (YNB-2). In YNB-1, amphotericin B showed broader MIC ranges, varying from 0.125 µg/ml to 1.0 µg/ml; in RPMI 1640 medium and YNB-2 the MICs were similar and in AM3 the MIC ranges were narrower. The same pattern was observed for MIC 90 (per cent). For fluconazole the media employed were RPMI 1640 and YNB-1. The MIC ranges were broader and elevated when YNB-1 was employed. MIC 50 (per cent) were 2.0 µg/ml in RPMI 1640 medium and 4.0 µg/ml in YNB-1. Our results indicate that RPMI 1640 supplemented with (2 per cent) glucose allowed a good growth at 48h; YNB as recommended by Ghannoum et al. provided a broader MIC range, AM3 provided a narrow MIC range for amphotericin B, and YNB-2 was very similar to RPMI 1640 medium.

Pitiose eqüina no Pantanal brasileiro: aspectos clínico-patológicos de casos típicos e atípicos / Equine pythiosis in the Brazilian Pantanal region: clinical and pathological findings of typical and atypical cases

A pitiose eqüina é doença endêmica no Pantanal Brasileiro e causa prejuízos significativos a eqüinocultura. Neste trabalho säo relatados 16 casos de pitiose subcutânea em eqüinos no Pantanal Sul-Matogrossense, que foram divididos em onze casos típicos e cinco casos atípicos, de acordo com o quadro clínico e o tempo de duraçäo das lesöes. O diagnóstico foi confirmado pela detecçäo de anticorpos específicos pelo teste ELISA, isolamento do agente e histopatológico. A duraçäo da doença variou entre 1 e 6 meses nos casos típicos e superior a 12 meses nos casos atípicos. As lesöes dos casos típicos caracterizavam-se por granulomas subcutâneos, ulcerados, com abundante secreçäo serossanguinolenta e prurido. Nos casos atípicos foram observadas lesöes subcutâneas caracterizadas por grandes massas "tumorais" circunscritas, recobertas por pele escura, sem ulceraçöes e com pouca secreçäo. Os animais estavam em bom estado nutricional e as lesöes apresentavam-se de aspecto organizado, às vezes pedunculadas. Histologicamente, foi observado tecido de granulaçäo com muitos eosinófilos nos casos típicos, enquanto os atípicos, se caracterizaram por hiperplasia pseuso-epiteliomatosa da epiderme e infiltrado eosinofílico. As características clínicas e histopatológicas completas das duas formas clínicas e os possíveis fatores responsáveis pelas diferenças ente as duas formas säo apresentados e discutidos

Aflatoxinas, ocratoxina A e zearalenona em alimentos para consumo animal no sul do Brasil-Parte II / Aflatoxin, ochratoxin A and zearalenone in animal feedstuffs in south Brazil. Part II

Os metabólitos tóxicos Aflatoxinas(AFL) B1,B2,G1 e G2, säo produzidos por linhagens de fungos Aspergillus flavus e A.parasiticus, Ocratoxina A (OCT) produzida por A.ochraceus e várias espécies de Penicillium e a Zearalenona(ZEA) pelo Fusarium graminearum. Estas micotoxinas foram pesquisadas em 519 amostras de diferentes substratos constituídos especialmente de milho e raçäo balanceada, além de outros produtos utilizados na alimentaçäo animal como arroz, sorgo, farelo de trigo e colza, provenientes do Brasil e uma amostra da Argentina durante o período compreendido entre os anos de 1987-1991. Foi empregado o método SOARES&RODRIGUES-AMAYA para extraçäo e quantificaçäo das micotoxinas, com limites de detecçäo de 4,5, 60p.p.b. para Aflatoxinas, Ocratoxina A e Zearalenona, respectivamente. Em 68,59 por cento das amostras näo foram detectadas estas micotoxinas, mas 24,86 por cento das amostras positivas estavam contaminadas por Aflatoxinas, 1,73 por cento por Ocratoxina A e 4,82 por cento das amostras estavam contaminadas por Zearalenona. O nível máximo de contaminaçäo por Aflatoxinas foi de 1906p.p.b., de 745p.p.b. por Ocratoxina A e de 4982p.p.b. por Zearalenona. Frente aos resultados obtidos, sugere-se o monitoramento constante destas micotoxinas, principalmente Aflatoxinas, por parte da indústria e a atençäo dos produtores de aves e suínos, pois estas micotoxinas comprometem a saúde animal e, por consequência, o desempenho produtivo destes animais

Método de confirmaçäo da presença de aflatoxinas por cromatografia em camada delgada - CCD / Methods of confirmation of aflatoxins by thin-Layer chromatography - CCD

Com o objetivo de selecionar uma metodologia cromatográfica, que permita a confirmaçäo da presença de aflatoxina em raçöes para consumo animal, foram empregados diferentes sistemas eluentes e adsorventes em camada delgada. Melhores resultados foram obtidos realizando-se uma cromatografia de suspeita, empregando o adsorvente sílica gel G, 250mm e sistema eluente tolueno: acetato de etila: clorofórmio: ácido fórmico (7:5:5:2), visualizaçäo UV (365nm) e reaçäo de cor com nebulizaçäo com H2SO4 1:1. Para cromatografia confirmatória foi utilizado como adsorvente sílica gel G, eo eluente éter etílico: metanol: água (93:3:1) mais UV, que permite também a quantificaçäo